1、加樣

　　對于間接ELISA試劑盒標本一般都要進(jìn)行稀釋?zhuān)绻訕硬粶示蜁?huì )造成誤差，尤其當稀釋倍數大時(shí)，很小的誤差，會(huì )導致較大的相對誤差，使陰性（或弱陽(yáng)性）標本呈陽(yáng)性（或陰性）。加樣時(shí)應將所加物加在ELISA板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可濺出，不可產(chǎn)生氣泡。目前，大部分血站都已使用全自動(dòng)酶免加樣系統處理標本，可較好地避免以上誤差。

　　2、洗滌

　　在ELISA試劑盒中正確的洗滌是保證得到可重復結果的關(guān)健一步，應引起操作者重視。無(wú)論是手工操作還是機器操作，得出不正確的結果常與不正確的洗滌有關(guān)，ELISA就是靠洗滌來(lái)達到分離游離和結合的酶標記物的目的。通過(guò)洗滌以消除殘留在板孔中沒(méi)能與固體抗原或抗體結合的物質(zhì)，以及在反應過(guò)程中非特異性吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。

　　3、 溫育

　　每種試劑都有其合適的反應模式，其中溫度和溫育時(shí)間控制是重要因素。因孵育溫度高，反應時(shí)間長(cháng)，會(huì )造成整板本底高，陽(yáng)性率高。溫育一般用濕盒或水浴，反應板不宜疊放，以保證各板溫度都能迅速平衡，為避免蒸發(fā)，板上應加蓋。

　　4、酶標儀判讀

　　作為記錄測定結果的儀器，酶標儀的性能穩定與否，決定結果的可靠度。首先酶標儀應定期進(jìn)行保養，對濾光片要定期校正；其次酶標儀波長(cháng)設置要正確，一般使用雙波長(cháng)，一個(gè)檢測波長(cháng)，一個(gè)參比波長(cháng)，以消除微孔板底部劃痕、不平、指印或液面高度差異造成的光干擾。此外，在用酶標儀讀數時(shí)一般先擦試微孔板底部并壓平板條。由于各種酶標儀性能有所不同，使用中應詳細閱讀說(shuō)明書(shū)

　　由于酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)目前在技術(shù)上缺乏標準化，盡管目前上以及我國有了部分標準血清或參比血清（血清盤(pán)）。但由于受方法學(xué)及技術(shù)條件的限制，在酶聯(lián)吸附測定中有時(shí)不可避免的會(huì )出現一定的非特異性，但我們可以通過(guò)以上措施把非特異性顯色降至低限底，從而提高檢測的特異性，并得到更準確、可靠的實(shí)驗結果。