草莓皺縮病毒（SCrV）酶聯(lián)免疫分析

試劑盒使用說(shuō)明書(shū)

使用目的：

本試劑盒用于測定植物組織，細胞及相關(guān)樣本中草莓皺縮病毒（SCrV）水平。

實(shí)驗原理

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中草莓皺縮病毒（SCrV）表達。用純化的草莓皺縮病毒（SCrV）抗體包被微孔板，制成固相抗體，可與樣品中草莓皺縮病毒（SCrV）相結合，經(jīng)洗滌除去未結合的抗原和其他成分后再與HRP標記的草莓皺縮病毒（SCrV）抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成終的黃色。用酶標儀在450nm波長(cháng)下測定吸光度（OD值），與CUTOFF值相比較，從而判定標本中草莓皺縮病毒（SCrV）的存在與否。

試劑盒組成

標本要求 

1．標本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻進(jìn)行，提取后應盡快進(jìn)行實(shí)驗。若不能馬上進(jìn)行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融

2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。

操作步驟

• 編號：將樣品對應微孔按序編號，每板應設陰性對照2孔、陽(yáng)性對照2孔、空白對照1孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）
• 加樣：分別在陰、陽(yáng)性對照孔中加入陰性對照、陽(yáng)性對照50μl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻，
• 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   
• 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
• 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
• 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
• 溫育：操作同3。
• 洗滌：操作同5。
• 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10分鐘.
• 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時(shí)藍色立轉黃色）。
• 測定：以空白孔調零，450nm波長(cháng)依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以?xún)冗M(jìn)行。

計算和結果判定：

  試驗有效性：陽(yáng)性對照孔平均值≥1.00; 陰性對照平均值≤0.10

  臨界值（CUT OFF）計算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15

  陰性判定：樣品OD值< 臨界值（CUT OFF）者為草莓皺縮病毒（SCrV）陰性

  陽(yáng)性判定：樣品OD值≥ 臨界值（CUT OFF）者為草莓皺縮病毒（SCrV）陽(yáng)性

。

注意事項

1．操作嚴格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，本試劑不同批號組分不得混用。

2．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開(kāi)封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。

3．濃洗滌液可能會(huì )有結晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結果。

• 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

5．底物請避光保存。

6．試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準，使用雙波長(cháng)檢測時(shí)，參考波長(cháng)為630nm

7．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。終止液為2M的硫酸，使用時(shí)必須注意安全。

保存條件及有效期

1．試劑盒保存：；2-8℃。

2．有效期：6個(gè)月