雞傳染性支氣管炎病毒抗體檢測試劑盒實(shí)驗原理及操作步驟

雞傳染性支氣管炎病毒抗體檢測試劑盒實(shí)驗原理

    本試劑盒系由預包被雞傳染性支氣管炎病毒重組N蛋白的酶標板、酶標記物及其他配套試劑組成，應用酶聯(lián)免疫法（ELISA）原理檢測雞血清或血漿中雞傳染性支氣管炎病毒抗體。實(shí)驗時(shí)，在酶標板中加入對照血清和稀釋的待檢血清，經(jīng)溫育后，若樣品中含有雞傳染性支氣管炎病毒的抗體，則將與酶標板上抗原結合，經(jīng)洗滌除去未結合的抗體和其他成分后；再加入酶標記物，與酶標板上抗原抗體復合物發(fā)生特異性結合；再經(jīng)洗滌除去未結合的酶結合物，在孔中加TMB底物液，與酶反應形成藍色產(chǎn)物，顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成正相關(guān)；加入終止液終止反應后，產(chǎn)物變?yōu)辄S色；用酶標儀在450nm波長(cháng)測定各反應孔中的吸光值，即可知樣品是否含有傳染性支氣管炎病毒抗體。

雞傳染性支氣管炎病毒抗體檢測試劑盒檢驗方法

1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘，恢復至室溫。

2.取所需用量酶標板條，設空白對照1孔、陰性/陽(yáng)性對照各2孔，未用的板條盡快密封，2～8℃保存。

3.空白對照孔加樣品稀釋液100μl；陰、陽(yáng)性對照孔分別加入陰、陽(yáng)性對照100μl；樣品孔每孔加入稀釋后的樣品100μl。

4.混勻，置37℃反應30分鐘。

5.扣去孔內液體，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置30秒后棄去，重復洗滌5次，拍干。

6.每孔加酶標記物100μl（空白孔除外）。置37℃反應30分鐘。

7.洗滌，同步驟5。

8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl，混勻，37℃避光反應10分鐘。

9.每孔加終止液50μl，混勻，用空白孔調零，于450nm(可用630nm作參比波長(cháng)）測定各孔吸光值（A值）。