組織、細胞到底該如何裂解？

實(shí)驗過(guò)程中難免會(huì )遇到特殊樣本比如組織和細胞，那我們我們又該如何來(lái)處理呢？常見(jiàn)的處理方法就是用RIPA來(lái)裂解。如發(fā)現 RIPA 有沉淀，請放室溫半小時(shí)或者常溫水浴使沉淀溶解。根據使用量，取每 1ml RIPA 加入 10ul PMSF，使 PMSF 的終濃度為 1mM，混勻備用（PMSF 現用現加）。

1、樣品前處理：

a)對于貼壁細胞：去除培養液，用 PBS、生理鹽水或無(wú)血清培養液洗一遍。按照 6 孔板每孔細胞量加入

150-250 ul 裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數下，使裂解液和細胞充分接觸。

b)對于懸浮細胞：離心收集細胞，按照 6 孔板每孔細胞量加入 150-250ul 裂解液的比例加入裂解液，用手

指輕彈懸浮細胞以充分裂解。充分裂解后應沒(méi)有明顯的細胞沉淀。如果細胞量較多，必需分裝成 5-10×10 5 細

胞/管，然后再裂解。

c)對于組織樣品：把組織剪切成細小的碎片。按照每 20mg 組織加入 150-250ul 裂解液的比例加入裂解液

(如果裂解不充分可以適當添加更多的裂解液，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當減少裂解液的用量) 。

用玻璃勻漿器勻漿，直至充分裂解。

2、后處理：

將裂解后的樣品 10000-14000g 離心 3-5 分鐘，取上清，即可進(jìn)行后續的蛋白濃度測定、SDS-PAGE、Western

blotting 和免疫沉淀等操作。

注意事項 ：

1、 使用本裂解液可以裂解細胞核，釋放出核蛋白的同時(shí)，也會(huì )將基因組一并釋放出來(lái)，造成細胞裂解液粘

稠，此時(shí)可以直接加入蛋白上樣緩沖液煮沸再離心，離心后直接上樣電泳；若想測定濃度，可入加少量 SDS

（1%），煮沸后離心測濃度。

2、 本系列蛋白提取試劑所提取的蛋白由于含有去污劑，所以不適合使用 Bradford 蛋白濃度測定試劑盒，請

選擇 BCA 法或者 Lowry 法檢測蛋白濃度。

3、 如果需要檢測和基因組結合特別緊密的蛋白，則可以通過(guò)超聲處理打碎打散粘稠狀物，隨后離心取上清

用于后續實(shí)驗。