臻科生物帶你了解ELISA的樣本收集與前期準備

        利用ELISA進(jìn)行臨床檢驗常見(jiàn)的樣本一般包括血液（指血，靜脈血），尿，糞便，腦脊液，胸腹水，前列腺液，精液，陰道分泌物等，這些樣本收集的時(shí)間、方法和保存都有一定的要求。

(一) 臨床樣本的收集

A、血液樣本

    有些生理因素，如吸煙、進(jìn)食、運動(dòng)、情緒波動(dòng)、妊娠、體位等均可影響血液中某些成分的變化，有些甚至還有晝夜變化。因此血液標本的采集應盡量避免生理因素干擾，以條件一致為宜，如無(wú)法避免，應在標本上注明該因素。

1．外周血

    一般選取左手無(wú)名指內側采血，該部位應無(wú)凍瘡，炎癥，水腫，破損。如該部位不符合要求，以其他手指部位代替。對燒傷病人，可選擇皮膚完整處采血。由于部分血液常規檢測（如白細胞計數、分類(lèi)等）受生理因素影響波動(dòng)過(guò)大，比較時(shí)宜使條件盡量一致。涉及到體內出、凝血功能的檢測項目（如血小板計數，出血時(shí)間或凝血時(shí)間等）的檢測，一定要注意了解患者是否用過(guò)抗凝、促凝藥物，以便在減少或避免干擾因素的影響。

2．靜脈血

    除涉及各種止血和血栓檢測等項目需采用抗凝靜脈血血漿外，目前絕大多數檢測項目的分析檢測可直接采用靜脈血的血清。在血清檢測項目中，有些（如血糖，血脂等）受飲食及晝夜因素影響較大，一般以清晨空腹血標本為宜；有些在血中衰變較快（血清酶活性測定如ACP活性等），0~4℃貯存活性減弱也不一，這些項目的檢測必須及時(shí)而快速；有些（如肌酸激酶等）受運動(dòng)等因素影響較大。抽血時(shí)避免溶血的發(fā)生也十分重要，尤其涉及血鉀，LDH等的測定。

B、尿液樣本

    同血標本一樣，尿液標本受飲食、運動(dòng)、藥物量等因素的影響也較大，特別是飲食的影響，故一般來(lái)說(shuō)晨尿優(yōu)于隨機尿。晨尿是指清晨起床后的次尿標本，較濃縮和酸化，有形成分（如血細胞，上皮細胞，管形）相對集中便于觀(guān)察。隨機尿即隨意一次尿，留取方便，但受飲食、運動(dòng)、藥物影響較甚，易于出現假陽(yáng)性和假陰性結果，如飲食性蛋白尿，飲食性糖尿，維生素C干擾潛血結果等。餐后尿（午餐后2小時(shí)收集的患者尿液）適用于尿糖，尿蛋白和尿膽原的檢查，此時(shí)的尿標本可增加試驗敏感性，檢出較輕微的病變。12小時(shí)尿細胞計數即Addis計數（前晚8時(shí)排空膀胱后留取至次日晨8時(shí)的所有尿液），因時(shí)間較長(cháng)，細菌易繁殖，須加入防腐劑甲醛。24小時(shí)尿（天晨8時(shí)排空膀胱后留取至次日晨8時(shí)的所有尿液）中化學(xué)物質(zhì)的定量，包括蛋白，糖，尿17-酮、17-羥類(lèi)固醇，兒茶酚胺，Ca2+等，檢測不同的物質(zhì)，選擇不同的防腐劑防腐。清潔中段尿多用于尿細菌培養，要求無(wú)菌，沖洗外陰后留取標本。

C、糞便樣本

    糞便標本的檢測對判斷消化系統疾病有重要參考價(jià)值。采集時(shí)要求用干凈的竹簽選取含有粘液、膿血等異常病變成分的糞便，對外觀(guān)無(wú)異常的糞便須從表面、深處及糞端多處取材。找寄生蟲(chóng)蟲(chóng)體及作蟲(chóng)卵計數應收集24小時(shí)糞便。查痢疾阿米巴滋養體應于排便后立即檢查，從有膿血和稀軟處取材，保溫送檢。查日本血吸蟲(chóng)蟲(chóng)卵時(shí)應取粘液、膿血部分，孵化毛蚴時(shí)至少留取30g糞便，且需盡快處理。檢查蟯蟲(chóng)卵須用透明薄膜拭子于晚12時(shí)或清晨排便前自肛門(mén)周?chē)欞盘幨萌〔⒘⒓寸R檢。隱血試驗（化學(xué)法），試驗前3日禁食肉類(lèi)及含動(dòng)物血食物并禁服鐵劑，維生素C等。所有糞便標本采集后1小時(shí)內應檢查完畢，以防止有形成分受消化酶及pH的破壞。以上針對臨床樣本指標檢測。

D、腦脊液樣本

    腦脊液標本采集后立即送檢，放置過(guò)久將影響檢驗結果：如細胞變性，破壞，導致計數和分類(lèi)不準；有些化學(xué)物質(zhì)如葡萄糖等將分解含量減少；細菌發(fā)生自溶影響細菌的檢出率。腦脊液抽取后一般分裝三個(gè)無(wú)菌管，管作細菌培養，第二管作化學(xué)分析和免疫學(xué)檢查，第三管作一般性狀及顯微鏡檢查，三管的順序不宜顛倒。因標本采集較難，全部送檢和檢測過(guò)程應注意安全。

E、胸腹水樣本

    與腦脊液標本一樣，采集后的標本注意安全，及時(shí)送檢。一般也分裝三管，一管作常規細胞學(xué)檢查，一管生化檢查，一管細菌培養，順序以與腦脊液相同為宜。

F、前列腺液樣本

    前列腺液標本由前列腺按mo后采集，液量少時(shí)直接滴在載玻片上及時(shí)送檢，須注意防止標本蒸干，量多時(shí)收集在潔凈干燥的試管中。若按mo不出前列腺液，可檢查按mo后的尿液沉渣。

G、精液樣本

    精液標本采集前應禁欲3~7天，排凈尿液后可用手yin法或其他方法將精液直接排入干凈的容器中，保溫并及時(shí)送檢。由于精子生成日間變動(dòng)較大，一般應檢查2~3次（每次間隔1~2周）方可做診斷。

H、陰道分泌物樣本

    陰道標本采集前24小時(shí)應禁止房事、盆浴、陰道檢查、陰道灌洗及局部上藥等，取材所用器械需清潔。一般用鹽水浸濕的棉拭子自陰道深部或陰道穹后部、宮頸管口等處取材，制成生理鹽水涂片后觀(guān)察陰道分泌物標本，經(jīng)期的女性患者不宜檢查陰道分泌物標本。

(二) ELISA的樣本實(shí)驗準備

在收集樣本前都必須有一個(gè)完整的計劃，必須清楚要檢測的成份是否足夠穩定。對收集后當天就進(jìn)行

檢測的樣本，及時(shí)儲存在4℃備用。對于隔天再檢測的樣本，及時(shí)分裝后凍存在-20℃備用，有條件的，zui好-70℃凍存備用。標本應避免反復凍融。

    液體類(lèi)標本:  包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養上清等。

1. 血清：

室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應再次離心。

2. 血漿：

應根據標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應再次離心。

3. 尿液：

用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。

4. 細胞培養上清：

檢測分泌性的成份時(shí)，用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。

5. 培養細胞

    檢測細胞內的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應再次離心。

6. 組織標本

    切割標本后，稱(chēng)取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑,

用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。

 組織標本

    切割標本后，稱(chēng)取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。

1，對于樣本要求保持鮮重

2，稱(chēng)取樣本中的重量不小于50mg，一般以1g為基準

3，勻漿的比例選取10%，相當于1g組織加9ml的勻漿液來(lái)進(jìn)行勻漿

4，勻漿液選取PBS（PH=7.2-7.4，濃度為0.01mol/L）

選用組織勻漿器或者碾缽進(jìn)行組織勻漿！

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